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FLAG标签和3xFLAG标签的序列

FLAG标签是最常用的用于检测过表达蛋白的标签。

常用的形式有FLAG和3xFLAG，常见的氨基酸序列为：

FLAG：

氨基酸序列：

DYKDDDDK

DNA编码序列：

GATTACAAGGACGACGATGACAAG

3xFLAG--第一种形式：

氨基酸序列：

DYKDDDDKGDYKDDDDKIDYKDDDDK

DNA编码序列：

GATTACAAGGATGACGACGATAAGGGAGATTACAAGGATGACGACGATAAGATCGATTACAAGGATGACGACGATAAG

3xFLAG--第二种形式：

氨基酸序列：

DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK

DNA编码序列：

GACTACAAAGACCATGACGGTGATTATAAAGATCATGACATCGACTACAAGGATGACGATGACAAG

3xFLAG--第三种形式：

氨基酸序列：

DYKDDDDKDYKDDDDKDYKDDDDK

DNA编码序列：

GATTACAAGGATGACGACGATAAGGACTATAAGGACGATGATGACAAGGACTACAAAGATGATGACGATAAA

经常接到电话来咨询这几个FLAG形式的区别，在这里我就大家关心的问题做个统一解释：1. 这几种形式的FLAG肯定是有不同的，至少长度不同。为什么要构建长度不同的FLAG标签呢？是这样的，大多数情况下FLAG标签会构建到蛋白的N端或者C端，而且大多数情况下蛋白的N端或者C端是游离在蛋白表面的，那么在这种情况下FLAG和3xFLAG没有什么区别，抗体都能结合得到。但是也有时候蛋白末端会被折叠到蛋白内部，或者被其他结合蛋白所遮蔽，那么更长的FLAG更有利于抗体结合表位的暴露，从而被抗体所结合、试验成功率也会提高 。2. 这几种形式都有相同的地方，就是它们都含有DDDDK，而这个通常是FLAG抗体的结合表位（抗体结合表位长度一般为4-7个氨基酸），所以对大家常用的FLAG抗体来说，这几种标签没有什么区别，都可以识别。3. 3xFLAG会的抗体结合信号会不会比1x的更强？我认为这要根据具体的实验类型来看，如果做IHC的话，3*flag会更好一些，如果做wb的话，结果应该是一样的，抗体结合的表位长度一般4-7个氨基酸，加上抗体本身非常巨大，抗体产生的空间位阻容不下第二个抗体结合在同一个3xFLAG上。