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当前位置: 首页>分子生物服务>分子互作>Co-IP免疫共沉淀

 

Co-IP免疫共沉淀

 

CoIP试剂盒
 产品名
 货号
 规格
 货
价格
 Co-IP试剂盒(protein A/G磁珠)

 FI8802(动物用

 FI8812(植物用)

 20次/40次
 现货






询价





 Co-IP试剂盒(protein G树脂)

 FI8803(动物用

 FI8813(植物用)

 20次/40次 现货

 ChainFree® Flag标签免疫共沉淀试剂盒

 FI8801(动物用

 FI8811植物

 12次/24次 现货
 ChainFree® HA标签免疫共沉淀试剂盒

 FI8806(动物用)

 FI8816(植物用)

 12次/24次 现货
 ChainFree® Myc标签免疫共沉淀试剂盒

 FI8807(动物用

 FI8817(植物用

 12次/24次 现货
 ChainFree® GFP标签免疫共沉淀试剂盒 FI8808(动物用)

 FI8818(植物用)

 12次/24次 现货
 ChainFree® mCherry标签免疫共沉淀试剂盒

 FI8809(动物用

 FI8819(植物用

 12次/24次 现货

免疫共沉淀(Co-IP)* 实验原理

结合了抗体的磁珠或树脂(Beads)与样本裂解液孵育,通过”抗原-抗体“之间的免疫作用,诱饵蛋白被吸附在Beads上,与此同时,诱饵蛋白的互作蛋白,也一起“共沉淀”到Beads上。洗涤去掉未结合的蛋白后,再用洗脱缓冲液将互作蛋白复合物从Beads上洗脱下来,得到免疫共沉淀(Co-IP)产物。Co-IP产物既可以用Western Blot检测已知蛋白,也可以用质谱鉴定未知蛋白。


当没有合适的诱饵蛋白抗体时,还可以通过表达融合了Flag标签的诱饵蛋白,利用Flag标签抗体做免疫沉淀。即样本过表达Flag-Bait,经裂解后与anti-Flag珠子孵育,诱饵融合蛋白与Beads结合,其互作蛋白“共沉淀”到Beads上,再经洗涤、洗脱后,用WB或质谱检测。



靖瑞百康生物10年科研服务经验,专业提供分子互作实验服务,包括蛋白与蛋白、蛋白与DNA、蛋白与RNA、RNA与RNA的相互作用技术,经验丰富,实验结果稳定、可靠。

我公司自有分子、细胞和质谱实验平台,能执行最优的实验路线,对微量互作蛋白的质谱鉴定有充足把控力,对后续功能分析有独到见解。

我们不仅会提供专业的售前方案建议、而且售后技术支持将一直保持到文章发表,确保您安心进行下游实验及投稿

目前,客户已在Nature子刊、Oncogene、Cell Research等高水平期刊成功发表大量高分文章





免疫共沉淀(Co-IP)* 实验流程


CoIP实验服务步骤流程_免疫共沉淀coip检测_Co-IP实验代做服务价格费用
内源蛋白抗体免疫共沉淀CoIP实验步骤



质谱鉴定_coip免疫共沉淀_Co-IP MS技术实验服务公司

标签抗体免疫共沉淀CoIP实验流程



免疫共沉淀(Co-IP)* 应用背景


蛋白质之间相互作用是其发挥生物学功能的主要模式,蛋白质会通过结合不同的伙伴来行驶不同的功能,形成复杂的信号转导网络。常见的蛋白互作研究方法主要有:免疫共沉淀(Co-IP)、pull down、酵母双杂交、荧光双分子互补(BiFC)、荧光共定位等。这些方法相互补充,通过多种方法共同验证蛋白质间的相互作用,能更大程度的避免假阳性结果。



1
免疫共沉淀Co-IP

Co-IP技术采用抗体捕获样本中的目标蛋白及其互作蛋白复合物,反应的是体内真实的生理结合,但不能显示这些相互作用是直接还是间接的;另外合适的免疫共沉淀抗体是决定实验成功的关键,有些蛋白没有合适的IP抗体,无法进行内源性Co-IP实验;通过构建带标签的表达载体,使目标蛋白与标签融合表达,再借助标签抗体即可完成Co-IP实验,但需要注意合适的转基因方法又是影响该方法成功的关键。


2
pull down

pull down技术将目标蛋白进行体外原核表达,使标签蛋白(GST或His等)与目标蛋白融合表达,借助标签的亲和介质将目标蛋白纯化出来,可以不受抗体、物种限制,比较轻松的获得目标蛋白的结合蛋白,还可以通过外源同时表达目标蛋白和待测蛋白,确定它们是否发生直接的相互作用,但该方法无法得知体内真实的结合情况。


3
酵母双杂交

酵母双杂交技术是比较古老的一种技术,将目标蛋白和待测蛋白与GAL4 的两个结构域BD和AD融合表达,在酵母细胞中,2个蛋白的结合使得BD和AD在空间上靠近,从而激活报告基因lacZ的表达。但是由于受试蛋白都需要和 AD/BD 结构域形成融合蛋白,空间构象可能改变;另外假阳性率也比较高。


4
荧光双分子互补(BiFC)

荧光双分子互补(BiFC)技术将目标蛋白和待测蛋白分别与GFP的两个片段融合表达,转染细胞后,2个蛋白的结合使得GFP两个片段空间上靠近,从而发出绿色荧光,该技术观测直观,操作简便,但空间分辨率大约 250nm,对于蛋白质相互作用来说依然是个相当远的距离,因此位置上靠近但并未结合的蛋白也可能显示阳性结果,假阳性率较高;另外该技术可以验证蛋白间的相互作用,但不能筛选未知互作蛋白。


5
荧光共定位

荧光共定位技术依靠荧光确定蛋白质具有相同定位,用于辅助证明而非直接证明细胞内蛋白间的相互作用。






免疫共沉淀Co-IP * 靖瑞百康服务内容


服务项目
服务内容结果交付实验周期客户提供
价格

Co-IP WB

(验证型)

样本质检

Western blot检测诱饵蛋白和待测蛋白)

样本的诱饵蛋白Western blot检测图

样本的待测蛋白Western blot检测图

3-4周

实验样本

诱饵蛋白的IP级抗体

待测蛋白抗体

实验信息表


点击询价


Co-IP调取诱饵蛋白及其互作蛋白

(2组:实验组、对照组)

IP产物的诱饵蛋白Western blot检测图

IP产物的待测蛋白Western blot检测图

CoIP实验报告

Co-IP MS

(筛选型)

样本质检(Western blot检测诱饵蛋白)样本的诱饵蛋白Western blot检测图6-7周

实验样本

诱饵蛋白的IP级抗体

实验信息表



点击询价



Co-IP调取诱饵蛋白及其互作蛋白

(2组:实验组、对照组)

IP产物的诱饵蛋白Western blot检测图

CoIP实验服务报告

IP产物的质谱检测及数据分析

质谱(LC-MS/MS)检测结果及报

互作蛋白筛选表格

生物信息学分析结果和报告




免疫共沉淀CoIP * 样本要求


样本类型

COIP-WB 建议送样量

COIP-MS 建议送样量

动物细胞3*10e7个细胞/组(约3个10cm皿)5*10e7个细胞/组(约5个10cm皿)
动物组织1g/组2g/组
植物叶片2g/组4g/组
植物根或果实4g/组
8g/组
菌体50ul菌体沉淀/组100ul菌体沉淀/组

▲注意:这里列出的均为每组样本的送样量,如果实验和对照组用的样本一致,此样本量*2。详细送样指南可联系靖瑞百康生物客服或销售索取。

 保存及运输:-80℃保存,干冰取样/运输,至少在送样前2天通知我司。



免疫共沉淀Co-IP * 结果示例


免疫共沉淀CoIP实验技术服务结果图

Co-IP WB:诱饵蛋白和待测蛋白Western blot检测图(阳性)


免疫共沉淀Coip实验服务结果图分析

Co-IP MS:诱饵蛋白Western blot检测图


Co-IP试验外包代做结果图分析

Co-IP MS:质谱检索表格(部分展示)



pull down生信分析结果.jpg

Co-IP MS:互作蛋白生信分析结果(部分展示)


微信截图_20240809091624.png



免疫共沉淀(Co-IP)服务案例—客户文章解析



Jiang S.Y. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP.

 Cancer Research. 2019. (中科院1区,IF=13.312).


胆固醇通过APMAP抑制EGFR降解诱导前列腺癌细胞转移



研究概述

转移性前列腺癌具有很高的致命性。已有报道表明,胆固醇与前列腺癌的发展有关;前期研究发现,胆固醇可以诱导前列腺癌细胞发生上皮-间质转化(EMT),但其作用及潜在机制尚不清楚。本研究证明胆固醇介导APMAP上调,APMAP通过与EGFR竞争结合EPS15R,进而抑制EGFR降解,激活ERK1/2通路,促进前列腺癌细胞EMT;提出APMAP可能是一种关键的调节剂,为高脂肪饮食、肥胖和癌症转移之间提供了联系。


11111.jpg



研究路线


细胞功能实验证实胆醇诱导前列腺癌细胞EMT的发生依赖于ERK1/2的激活
RNA-seq、蛋白组学等实验筛选和验证与胆固醇有关的差异基因和蛋白,确定ERK1/2的上游凋节因子“ APMAI和“"EGFR”作为后续研究目标
APMAP基因敵除后的RNA-seq结果及其细胞实验均显示APMAP和胆固醇可能有相似的功能
APMAP和EGFR的表达关系实验表明 APMAP通过调节EGFR参与胆固醇诱导的EMT过程
免疫共沉淀Co-IP结合质谱实验找到 APMAP的互作蛋白EPS15R
免疫荧光结果显示胆固醇诱导使EPS15R和APMAP的作用增强,EPS15R与EGFR解离,进而抑制EGFR降解
临床样本分析APMAP与前列腺癌的关系





免疫共沉淀(Co-IP) * 客户文章


1. Li H.B. et al: The plant ESCRT component FREE1 shuttles to the nucleus to attenuate abscisic acid signaling. Nature Plants. 2019,IF=17.352.
【研究内容】:客户发现,作为内体蛋白分选转运复合体成分之一的FREE1基因,受到脱落酸刺激时候会发生磷酸化并移位到细胞核。客户利用酵母双杂交技术找到两个核蛋白ABF4 and ABI5会与FREE1结合,免疫共沉淀CoIP实验进一步证实了FREE与这两个蛋白的互作。后续实验表明,FREE1通过抑制ABF4、ABI5对下游基因的调控能力,参与了脱落酸信号通路。
使用相关技术:质谱鉴定、免疫共沉淀co-ip、Co-IP MS实验


2. Jiang, S. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP. Cancer Research.2019,IF= 13.312.
【研究内容】:客户利用蛋白质组学技术,筛选出胆固醇致前列腺癌发生上皮间质转变(EMT)的重要基因APMAP和EGFR。通过在前列腺癌细胞表达3*Flag-APMAP基因,并利用免疫共沉淀CoIP及质谱鉴定技术,客户发现EPS15R可与APMAP结合。进一步的研究证实,体内EPS15R-APMAP复合物通过EGFR致使细胞发生EMT。
使用相关技术:蛋白质组学、质谱鉴定、免疫共沉淀CoIP


3. Huang C.Y. et al: UBAP2L arginine methylation by PRMT1 modulates stress granule assembly. Cell Death Differ. 2020 , IF=12.067.
【研究内容】:前期研究表明UBAP2L蛋白参与应激颗粒形成。客户在这项研究中,用免疫共沉淀结合质谱等技术,发现PRMT1甲基化UBAP2L,UBAP2L蛋白并且和另外三个应激颗粒形成有关的重要蛋白有相互作用。这些蛋白复合物介导了应激颗粒的形成。
使用相关技术:coip技术服务、质谱鉴定、修饰位点鉴定



免疫共沉淀(CoIP)* 靖瑞百康服务优势



1
近十年服务经验,服务客户众多,案例发表在Nature Cell Biology、Nature Plants、Cancer Research等知名期刊上
2
对蛋白互作的筛选鉴定理解深刻,擅长针对客户具体情况提出合适的方案建议
3
自有分子及细胞生物实验平台,能有效制定并执行最优的实验路线
4
自有蛋白质组学平台,对微量CoIP实验产物的质谱鉴定有十足的把控能力,对后续的生物信息分析有独到的见解
5
售后技术支持将一直保持到客户发表文章,确保客户安心免疫共沉淀下游实验及投稿



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