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详细说明:

当前位置: 首页>miRNA/siRNA>miRNA过表达

 

miRNA 过表达质粒构建与miRNA MIMICS过表达RNA

 

miRNA的过表达可以通过两种方式实现,一种为构建过表达质粒,模拟细胞内miRNA成熟过程,如果构建到慢病毒载体,后期也可以实现稳转细胞系下的miRNA稳定过表达;另一种方式为通过化学合成的模拟物miRNA MIMICS来实现!下面为我司的2种过表达实现途径!

1:miRNA过表达质粒构建

MicroRNA(miRNA)是一类真核生物内源性的小分子单链RNA,通常长为18~25nt,能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对结合,引起靶序列降解或抑制其翻译,从而对基因进行转录后的表达调控。


MicroRNA 表达载体构建

MicroRNA(miRNA)是一类真核生物内源性的小分子单链RNA,通常长为18~25nt,能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对结合,引起靶序列降解或抑制其翻译,从而对基因进行转录后的表达调控。我司MicroRNA载体利用CMV启动子可以在众多哺乳动物细胞中快速、高效、持续表达pre-miRNA,经过Drosha(RNaseⅢ)作用形成small hairpin pre-miRNAs(约70nt),再过Dicer作用形成成熟的microRNA(约22nt),作用靶mRNA,起到表达调控作用。

microRNA过表达载体

靖瑞百康过表达载体提供两种过表达的方式:

1. 从天然的基因组序列中表达pre-miRNA转录本构建pre-microRNA。插入序列不仅包含pre-miRNA茎环结构,同时构建100-200bp长的上下游两端的侧翼序列。使用使用pol-Ⅱ(如CMV)启动子,这种构建方式保证高水平的表达pre-microRNA。表达出来的pre-miRNA的生理活动尽可能接近天然状态。



使用这种构建方式,客户只需提供miRNA的具体信息及指定过表达载体类型,我们完成序列合成,质粒构建。





目录号

产品名称

规格

价格

交货期限

A09001

质粒型microRNA 过表达载体-1

(pre-miRNA+flanking sequences, ~500bp)

质粒5ug+甘油菌一管

¥2,000

1-2周



2. 利用我司优化过的载体,模拟内源miRNA-155的表达模块,这种构建方法解决了不同miRNA表达效率差异的问题,同时也有效的避免了有些内源miRNA表达时产生-3p,-5p的问题。miRNA的发夹序列融合在EGFP报告基因的后面,模拟miRNA在体内的成熟过程。







 microRNA载体元件信息及用途

特征

用途

CMV promoter

高表达目的基因

EmGFP

利用荧光显微镜观察转染效果

Blasticidin resistance gene

可用来筛选稳定细胞系

Spectinomycin

筛选含有已经转化质粒的E. coli

pUC origin

质粒可以在E. coli中进行高拷贝



使用这种构建方式,客户只需提供miRNA的具体信息,我们完成序列合成,质粒构建。






目录号

产品名称

规格

价格

交货期限

A09002

质粒型microRNA 过表达载体-2

(pGCMV/EGFP/miR/Blasticidin)

质粒5ug+甘油菌一管

¥1,500

1-2周



备注:保证插入序列正确,不保证miRNA的过表达效率,不保证转染效率。所有实验仅供科研使用。

microRNA抑制子表达载体


靖瑞百康生物提供两种miRNA抑制子载体构建的方式:


1. ;)PAN>利用靖瑞百康优化过的载体,模拟内源miRNA-155的表达模块,来表达miRNA inhibitor序列。这种构建与靖瑞百康miRNA过表达方式2使用同样的载体系统,方便客户使用同一套系统完成miRNA的过表达与抑制。
使用这种构建方式,客户只需提供miRNA的具体信息,我们完成序列合成,质粒构建。




目录号

产品名称

规格

价格

交货期限

A09003

质粒型microRNA 抑制子载体-1

(pGCMV/EGFP/miR/Blasticidin)

质粒5ug+甘油菌一管

¥1,500

1-2周


2. miRNA sponge(海绵)载体构建:靖瑞百康通过构建载体,表达包含多个成熟miRNA结合位点的RNA序列,通过吸附结合成熟miRNA,从而抑制miRNA的作用,从而进行功能缺失性研究。



miRNA sponge的特点:

a. 由于miR Sponges是由质粒编码的,它能够通过真核表达载体达到稳定沉默细胞microRNA的目的;
b. 能够沉默整个家族的microRNA以达到对整个家族microRNA功能的研究;
c. 可以利用miR Sponges实现体内外loss of function研究;
d. 可以用来检测luciferase靶基因报告系统分析;
e. 可以自由组合串联不同miRNA抑制子序列,达到沉默多种不同miRNA的目的。
使用这种构建方式,客户需提供miRNA的具体信息、预构建miRNA inhibitor的重复数及预构建inhibitor的序列信息,我们完成序列合成,质粒构建。


目录号

产品名称

规格

价格

交货期限

C09004

质粒型microRNA 抑制子载体-2

(microRNA inhibitor sponge, 3重复)

质粒5ug+甘油菌一管

¥1,500

1-2周


microRNA靶基因荧光素酶报告载体

靖瑞百康采用Promega的psicheck2的载体系统完成靶基因3’ UTR质粒载体构建服务。可提供基于人、小鼠、大鼠基因的UTR构建。

psicheck2报告基因检测系统用来检测siRNA/miRNA与靶基因是否可能存在调控作用,该报告系统报告荧光(hRluc),其下游构建了靶基因3’UTR区域,通过对该荧光的监测,即可验证siRNA/miRNA对该靶标是否有调控作用;另有一校正荧光(hluc) 作为稳定内参,用于监测质粒表达效率。

严格的实验体系,要求miRNA与mRNA 3’ UTR验证实验中需要构建靶mRNA的点突变载体,以验证靶点作用有效性。突变载体构建主要依据预测的miRNA与靶基因3’UTR的稳定结合区域(即种子区)。通过种子区全部碱基或部分碱基突变导致miRNA与靶基因3’UTR区域的结合能力大大降低,从而判断是否存在miRNA的调控作用。

完成miRNA靶基因报告基因载体构建,需要客户提供:miRNA具体信息,预测靶基因信息,miRNA与靶mRNA结合位点信息。

目录号

产品名称

规格

价格

交货期限

A08005

双荧光素酶报告实验载体构建(≤500bp)a

质粒5ug+甘油菌一管

¥2,000

1-2周

A08006

双荧光素酶报告实验突变载体构建(种子区突变)b

质粒5ug+甘油菌一管

¥2,000

1-2周


注:
a. 靶基因3’ UTR长度须小于500bp,否则价格及合成周期另计;
b. 单位点(即1个miRNA-mRNA作用位点) 突变价格如上,多位点突变价格及合成周期另计。
Lentivirus microRNA表达载体



目录号

产品名称

规格

价格

交货期限

A06001

慢病毒干扰载体 LV-1 (pLVXU6/GFP)

质粒5ug+甘油菌一管  

1000

2周

A06002

慢病毒干扰载体 LV-2 (ppLVXU6/Puro)

质粒5ug+甘油菌一管  

1000

2周

A06003

慢病毒干扰载体 LV-3 (ppLVXU6/GFP+Puro)

质粒5ug+甘油菌一管  

1000

2周

A06004

慢病毒干扰载体 LV-9 (ppLVXU6/RFP)

质粒5ug+甘油菌一管  

1000

2周

我司microRNA 过表达载体库

靖瑞百康公司已经利用自己的miRNA载体骨架成功构建为数众多的miRNA的过表达载体,载体库中的miRNA expression vectors 1-2周内即可出库,性价比极高!




Name Accession Species Seqence
hsa-miR-155 MIMAT0000646 Homo sapiens UUAAUGCUAAUCGUGAUAGGGGU
hsa-miR-106b MIMAT0000680 Homo sapiens UAAAGUGCUGACAGUGCAGAU
hsa-let-7a MIMAT0000062 Homo sapiens UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUU
hsa-miR-15a MIMAT0000068 Homo sapiens UAGCAGCACAUAAUGGUUUGUG
hsa-miR-16 MIMAT0000069 Homo sapiens UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG
hsa-miR-17 MIMAT0000070 Homo sapiens CAAAGUGCUUACAGUGCAGGUAG
hsa-miR-143 MIMAT0000435 Homo sapiens UGAGAUGAAGCACUGUAGCUC
hsa-miR-145 MIMAT0000437 Homo sapiens GUCCAGUUUUCCCAGGAAUCCCU
hsa-miR-125b MIMAT0000423 Homo sapiens UCCCUGAGACCCUAACUUGUGA
hsa-miR-218 MIMAT0000275 Homo sapiens UUGUGCUUGAUCUAACCAUGU
hsa-miR-451 MIMAT0001631 Homo sapiens AAACCGUUACCAUUACUGAGUU
hsa-miR-148a MIMAT0000243 Homo sapiens UCAGUGCACUACAGAACUUUGU
hsa-miR-122 MIMAT0000421 Homo sapiens UGGAGUGUGACAAUGGUGUUUG
dre-miR-737 MIMAT0003768 Danio rerio AAUCAAAACCUAAAGAAAAUA
hsa-miR-21 MIMAT0000076 Homo sapiens UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA
hsa-miR-194 MIMAT0000460 Homo sapiens UGUAACAGCAACUCCAUGUGGA
hsa-miR-150 MIMAT0000451 Homo sapiens UCUCCCAACCCUUGUACCAGUG
hsa-miR-491-5p MIMAT0002807 Homo sapiens AGUGGGGAACCCUUCCAUGAGG
hsa-miR-15b MIMAT0000417 Homo sapiens UAGCAGCACAUCAUGGUUUACA
hsa-miR-29b MIMAT0000100 Homo sapiens UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUU
hsa-miR-30a MIMAT0000087 Homo sapiens UGUAAACAUCCUCGACUGGAAG
hsa-miR-29c MIMAT0000681 Homo sapiens UAGCACCAUUUGAAAUCGGUUA
hsa-miR-195 MIMAT0000461 Homo sapiens UAGCAGCACAGAAAUAUUGGC
hsa-miR-7 MIMAT0000252 Homo sapiens UGGAAGACUAGUGAUUUUGUUGU
hsa-miR-886-5p MIMAT0004905 Homo sapiens CGGGUCGGAGUUAGCUCAAGCGG
hsa-miR-182 MIMAT0000259 Homo sapiens UUUGGCAAUGGUAGAACUCACACU
hsa-miR-497 MIMAT0002820 Homo sapiens CAGCAGCACACUGUGGUUUGU
hsa-miR-375 MIMAT0000728 Homo sapiens UUUGUUCGUUCGGCUCGCGUGA
hsa-miR-26b MIMAT0000083 Homo sapiens UUCAAGUAAUUCAGGAUAGGU
hsa-miR-128 MIMAT0000424 Homo sapiens UCACAGUGAACCGGUCUCUUU
hsa-miR-200b MIMAT0000318 Homo sapiens UAAUACUGCCUGGUAAUGAUGA
hsa-miR-320a MIMAT0000510 Homo sapiens AAAAGCUGGGUUGAGAGGGCGA
hsa-miR-196b MIMAT0001080 Homo sapiens UAGGUAGUUUCCUGUUGUUGGG
mmu-miR-19b MIMAT0000513 Mus musculus UGUGCAAAUCCAUGCAAAACUGA
hsa-let-7c MIMAT0000064 Homo sapiens UGAGGUAGUAGGUUGUAUGGUU
hsa-miR-9 MIMAT0000441 Homo sapiens UCUUUGGUUAUCUAGCUGUAUGA
hsa-miR-373 MIMAT0000726 Homo sapiens GAAGUGCUUCGAUUUUGGGGUGU
hsa-miR-338-3p MIMAT0000763 Homo sapiens UCCAGCAUCAGUGAUUUUGUUG
hsa-miR-98 MIMAT0000096 Homo sapiens UGAGGUAGUAAGUUGUAUUGUU
hsa-miR-214 MIMAT0000271 Homo sapiens ACAGCAGGCACAGACAGGCAGU
dre-miR-16a MIMAT0001774 Danio rerio UAGCAGCACGUAAAUAUUGGUG
bta-miR-139 MIMAT0003788 Bos taurus UCUACAGUGCACGUGUCUCCAGU
bta-miR-30d MIMAT0003533 Bos taurus UGUAAACAUCCCCGACUGGAAGCU
hsa-miR-26a MIMAT0000082 Homo sapiens UUCAAGUAAUCCAGGAUAGGCU

 

2:miRNA mimics模拟物化学合成

miRNA mimics是miRNA 的模拟物,为化学合成的成熟miRNA双链,能增强内源性miRNA功能。包括一条与目标miRNA成熟体序列一致的序列,

以及一条与miRNA成熟体序列互补的序列。本公司合成的miRNA minics涵盖了miRBase数据库中人、小鼠和大鼠几乎所有的miRNA,模拟生物体内源的

miRNA,特异性增强内源性miRNA的功能。同时本公司可以为客户提供不同形式、不同长度以及由客户自行设计的miRNA,方便客户选择。

microRNA标准序列来自miRBase(http://www.mirbase.org/)。

产品名称Amount(nmol)交货期
2od4od8od>10od

  miRNA Mimics

450 元

询价

询价

询价

1~2周

miRNA Mimics nagetive control

300 元

询价

询价

询价

1~2周

 

 

 

 

 

 

产品应用

我司合成的miRNA mimics 产品能够被转染到相应的目的细胞中,模拟microRNA的作用,还可以用于验证靶基因与miRNA的之间的关系。

 

1.质量保证2.发货时间3.售后处理
我司产品发货前均经过质量检测,确保您收到的产品质量准确无误!Generaybio拥有大量的现货产品,本公司的现货产品从订货日期起一周以内即可到货,大大缩短了您的等待时间!另外Generaybio的快速克隆及病毒包装平台也能让您体验到前所未有的快速定制服务!Generaybio所售出的产品全部登记在册,如果您拿到我们的产品觉得和实质不相符或存在问题,您只需要告诉我们相关产品信息我们会迅速做出反应,为您提供解决方案
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基因合成,亚克隆构建,3’UTR验证实验

启动子合成及验证,慢病毒包装

腺病毒包装。腺相关病毒包装

稳转株构建

 



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