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当前位置: 首页>分子生物服务>分子互作>GST pull down

 

GST pull down

 

GST pull-down试剂盒



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 FI8804-20T 20次 现货
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 FI8804-40T 40次 现货


GST pull down技术是体外条件下研究蛋白质相互作用的方法。先将体外表达的GST融合蛋白结合到谷胱甘肽Beads上,再将靶蛋白-GST-Beads和细胞裂解液孵育,这样互作蛋白便一起吸附在Beads上。洗涤掉未结合的蛋白后,再用洗脱液将互作蛋白复合物从Beads洗脱下来,即GST pull down产物。这种互作复合物既可以用Western Blot检测已知蛋白,也可用质谱鉴定出未知蛋白。

靖瑞百康10年科研服务经验,专业提供分子互作实验服务,包括蛋白与蛋白、蛋白与DNA、蛋白与RNA、RNA与RNA的相互作用技术,经验丰富,实验结果稳定可靠。

我公司自有分子、细胞和质谱实验平台,能执行最优的实验路线,微量互作蛋白质谱鉴定有充足把控力,对后续功能分析有独到见解。

我们不仅会提供专业的售前方案建议、而且售后技术支持将一直保持到文章发表,确保您安心进行下游实验及投稿

目前,客户已在Nature子刊、Oncogene、Cell Research等高水平期刊成功发表大量高分文章(点击查看客户文献)






GST pull-down * 实验流程


gst pulldown实验详细步骤_GST-pull down实验技术服务外包_GST标签蛋白.jpg


GST pull-down * 应用背景



蛋白-蛋白间的相互作用是蛋白质发挥生物学功能的主要模式,蛋白质会通过结合不同的伙伴来行驶不同的功能,形成复杂的信号转导网络。常见的蛋白相互作用方法主要有免疫共沉淀(Co-IP)、pull down、酵母双杂交、荧光双分子互补(BiFC)、荧光共定位等。


pull down技术将目标蛋白进行体外原核表达,使标签蛋白(GST或His等)与目标蛋白融合表达,借助标签的亲和介质将目标蛋白纯化出来,可以不受抗体、物种限制,比较轻松的获得目标蛋白的结合蛋白,还可以通过外源同时表达目标蛋白和待测蛋白,确定它们是否发生直接的相互作用,或者确定两个蛋白结合的结构域,但该方法无法得知体内真实的结合情况。



GST pull-down * 靖瑞百康服务内容


 服务项目服务内容结果交付实验周期  
客户提供价格

GST pull down WB

(验证型)

诱饵蛋白原核表达载体构建(选做)载体质粒、测序结果和实验报告4-5周

诱饵基因质粒模板

实验样本

待测蛋白抗体

实验信息表

点击询价



诱饵蛋白原核表达和Western blot检测诱饵蛋白Western blot检测图
样本中待测蛋白的Western blot检测待测蛋白Western blot检测图

GST pull down捕获诱饵蛋白及其互作蛋白

(实验组、空载对照组)

诱饵蛋白Western blot检测图

pull down实验报告

GST pull down  MS

(筛选型)       

诱饵蛋白原核表达载体构建(选做)

载体质粒、测序结果和实验报告

6-7周      

诱饵基因质粒模板

实验样本

实验信息表

点击询价

诱饵蛋白原核表达和Western blot检测诱饵蛋白Western blot检测图

GST pull down捕获诱饵蛋白及其互作蛋白

(实验组、GST对照组、裂解液对照组)

诱饵蛋白Western blot检测图

pull down实验报告

LC-MS/MS检测及数据分析

质谱检测结果及报告

互作蛋白筛选表格

生物信息学分析结果和报告



GST pull-down * 样本要求


样本类型

GST pull down WB建议送样量

GST pull down MS建议送样量

动物细胞3*10e7个细胞/组(约3个10cm皿)5*10e7个细胞/组(约5个10cm皿)
动物组织1g/组2g/组
植物叶片2g/组4g/组
植物根或果实4g/组
8g/组
菌体50ul菌体沉淀/组100ul菌体沉淀/组

▲注意:这里列出的均为每组样本的送样量,如果实验和对照组用的样本一致,此样本量*2。详细送样指南可联系靖瑞百康客服或销售索取。

 保存及运输:-80℃保存,干冰取样/运输,至少在送样前2天通知我司。



GST pull-down * 结果示例


GST pull down试验服务结果分析

GST pull down WB结果图(阳性)



GST-pull down外包实验服务结果分析

GST Pull-down MS:Western blot检测图



GST pull down实验服务费用价格实惠质量高

GST pull-down MS:质谱检索表格(部分展示)



pull down生信分析结果.jpg

GST pull-down MS:互作蛋白生信分析结果(部分展示)




GST pull-down服务案例—客户文章解析


Chen S.L. et al:  A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. Cancer Research. 2018. (中科院1区,IF=13.312).


GYS2/p53负反馈环抑制HBV相关性肝细胞癌的肿瘤生长



研究概述

糖代谢异常是癌症的突出特征,作者前期研究发现肝细胞癌(HCC)中糖原含量降低,并与患者总体生存情况不良相关,探索HCC中的异常糖代谢机制或许可以为肝细胞癌的治疗提供新靶点。本研究首次报道了HCC组织中的糖原含量显著降低,并与患者的不良预后相关,这归因于新发现的HBx/GYS2/p53信号轴。低表达的GYS2促进HCC细胞增殖而非迁移,并提供了两条独立的证据来支持GYS2和p53之间的关系。一方面,GYS2与MDM2竞争结合p53,以稳定p53免于蛋白酶体降解;另一方面,p53以负反馈方式抑制GYS2表达和糖原含量。这些数据表明p53和GYS2可能通过平衡彼此的表达而在HCC中发挥功能。


摘要图.png


研究路线


RNA-seq和qPCR等结果显示HCC组织中的GYS2(糖原合成酶2)显著下调,并与患者不良预后相关
细胞和小鼠实验表明GYS2的缺失促进了肝癌细胞增殖和肿瘤生长
GYS2敲除细胞的RNA-seq实验发现p53通路都受到明显抑制
Co-IP和 GST pull down证明GYS2通过与p53的直接相互作用发挥肿瘤抑制功能
CO-IP和GST pull down实验发现GYS2、p53和E3泛素连接酶MDM2相互作用形成复合体,GYS2与p53竞争结合MDM2来抑制p53泛素化,稳定p53蛋白水平
荧光素酶和ChIP等实验表明p53蛋白结台GYS2启动子,通过p300介导的乙酰化,在转录水平上抑制GYS2
对HBV阳性肝中的关键致癌蛋白HBx的研究发现,HBx、HDAC1与乙酰化的p53相互作用,共同抑制了GYS2





GST pull down服务 * 客户文章


1. Yu C.P. et al: Flot2 acts as a novel mediator of podocyte injury in proteinuric kidney disease. 2023. Int J Biol Sci. 2区, IF=10.75.
【研究内容】:足细胞损伤是慢性肾脏疾病(CKD)的常见标志。本研究证实Flot2在足细胞中表达,且能减少足细胞损伤。在LPS/ADR诱导肾病小鼠模型中,足细胞特异性Flot2的缺失会加重蛋白尿、足细胞损伤和肾小球病变。通过GST pull down和Co-IP实验,发现Flot2和podocin通过SPFH结构域直接相互作用。同时还发现Flot-2是转录因子KLF15的直接靶点。
使用相关技术: GST pull down实验、免疫共沉淀Co-IP


2. Chen S.L. et al: A GYS2/p53 Negative Feedback Loop Restricts Tumor Growth in HBV-Related Hepatocellular Carcinoma. 2018. Cancer Research. 1区, IF=13.312.
【研究内容】:糖原合成酶2(GYS2)在HCC中的表达明显下调,并与糖原含量降低和不良患者预后相关。本研究利用Co-IP和GST pull down等方法证明GYS2与MDM2竞争性结合,阻止MDM2介导的p53泛素化和降解;GYS2还增强了p300诱导的p53蛋白K373/382位点的乙酰化,进而负反馈抑制了HBx/HDAC1复合物支持下的GYS2转录,从而限制乙肝病毒相关性肝癌的生长
使用相关技术: GST 融合蛋白、GST pulldown实验、GST pull-down技术



3. You H. J. et al: Hepatitis B virus X protein promotes vimentin expression via LIM and SH3 domain protein 1 to facilitate epithelial-mesenchymal transition and hepatocarcinogenesis. Cell. 2021. Commun Signal. 2区, IF=8.4.
【研究内容】:波形蛋白(vimentin)在乙肝病毒X(HBX)阳性的肝癌细胞和HBV相关肝细胞癌(HCC)组织中的表达均升高。机制研究表明,HBX能够通过LASP1增强了vimentin的表达。一方面,PI3-K、ERK和STAT3信号通路参与了LASP1介导的vimentin上调。另一方面,GST pull down方法确定了HBX直接与vimentin和LASP1相互作用,保护vimentin免受泛素化介导的蛋白降解,促进Vimentin蛋白的稳定性。

使用相关技术: GST-pull down实验gst pull down-ms实验,LC-MS/MS蛋白质谱鉴定


4. Wang J. et al: ENO1 Binds to ApoC3 and Impairs the Proliferation of T Cells via IL-8/STAT3 Pathway in OSCC. 2022. Int J Mol Sci. 2区, IF=6.208.

【研究内容】:α-烯醇化酶(ENO1)是一种代谢酶,与口腔鳞状细胞癌(OSCC)淋巴转移有关。本研究通过GST pull down MS寻找与转移性OSCC患者术后淋巴引流液(PLD)中的ENO1相互作用的蛋白,发现了ENO1的新互作蛋白ApoC3。两者的结合引起白细胞介素(IL)-8的产生,进而激活Jurkat T细胞STAT3信号通路,促进细胞凋亡,抑制Jurkat T细胞增殖。

使用相关技术: GST pull-down MS实验,gst pulldown实验,LC-MS/MS质谱鉴定




GST pull down * 靖瑞百康服务优势


1
近十年服务经验,服务客户众多,案例发表在Nature Cell Biology、Nature Plants、Cancer Research等知名期刊上
2
对蛋白互作的筛选鉴定理解深刻,擅长针对客户具体情况提出合适的方案建议
3
自有分子及细胞生物实验平台,能有效制定并执行最优的实验路线
4
自有蛋白质组学平台,对微量CoIP实验产物的质谱鉴定有十足的把控能力,对后续的生物信息分析有独到的见解
5
售后技术支持将一直保持到客户发表文章,确保客户安心免疫共沉淀下游实验及投稿



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