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Co-IP免疫共沉淀
| 产品名 | 货号 | 规格 | 货期 | 价格 |
| Co-IP试剂盒（protein A/G磁珠） | FI8802（动物用） FI8812（植物用） | 20次/40次 | 现货 | |
| Co-IP试剂盒（protein G树脂） | FI8803（动物用） FI8813（植物用） | 20次/40次 | 现货 | |
ChainFree® Flag标签免疫共沉淀试剂盒 | FI8801（动物用） FI8811（植物用） | 12次/24次 | 现货 | |
| ChainFree® HA标签免疫共沉淀试剂盒 | FI8806（动物用） FI8816（植物用） | 12次/24次 | 现货 | |
| ChainFree® Myc标签免疫共沉淀试剂盒 | FI8807（动物用） FI8817（植物用） | 12次/24次 | 现货 | |
| ChainFree® GFP标签免疫共沉淀试剂盒 | FI8808（动物用） FI8818（植物用） | 12次/24次 | 现货 | |
| ChainFree® mCherry标签免疫共沉淀试剂盒 | FI8809（动物用） FI8819（植物用） | 12次/24次 | 现货 |
结合了抗体的磁珠或树脂（Beads）与样本裂解液孵育，通过”抗原-抗体“之间的免疫作用，诱饵蛋白被吸附在Beads上，与此同时，诱饵蛋白的互作蛋白，也一起“共沉淀”到Beads上。洗涤去掉未结合的蛋白后，再用洗脱缓冲液将互作蛋白复合物从Beads上洗脱下来，得到免疫共沉淀（Co-IP）产物。Co-IP产物既可以用Western Blot检测已知蛋白，也可以用质谱鉴定未知蛋白。
当没有合适的诱饵蛋白抗体时，还可以通过表达融合了Flag标签的诱饵蛋白，利用Flag标签抗体做免疫沉淀。即样本过表达Flag-Bait，经裂解后与anti-Flag珠子孵育，诱饵融合蛋白与Beads结合，其互作蛋白“共沉淀”到Beads上，再经洗涤、洗脱后，用WB或质谱检测。
靖瑞百康生物10年科研服务经验，专业提供分子互作实验服务，包括蛋白与蛋白、蛋白与DNA、蛋白与RNA、RNA与RNA的相互作用技术，经验丰富，实验结果稳定、可靠。
我公司自有分子、细胞和质谱实验平台，能执行最优的实验路线，对微量互作蛋白的质谱鉴定有充足把控力，对后续功能分析有独到见解。
我们不仅会提供专业的售前方案建议、而且售后技术支持将一直保持到文章发表，确保您安心进行下游实验及投稿。
目前，客户已在Nature子刊、Oncogene、Cell Research等高水平期刊成功发表大量高分文章。
内源蛋白抗体免疫共沉淀CoIP实验步骤
标签抗体免疫共沉淀CoIP实验流程
蛋白质之间相互作用是其发挥生物学功能的主要模式，蛋白质会通过结合不同的伙伴来行驶不同的功能，形成复杂的信号转导网络。常见的蛋白互作研究方法主要有：免疫共沉淀（Co-IP）、pull down、酵母双杂交、荧光双分子互补（BiFC）、荧光共定位等。这些方法相互补充，通过多种方法共同验证蛋白质间的相互作用，能更大程度的避免假阳性结果。
Co-IP技术采用抗体捕获样本中的目标蛋白及其互作蛋白复合物，反应的是体内真实的生理结合，但不能显示这些相互作用是直接还是间接的；另外合适的免疫共沉淀抗体是决定实验成功的关键，有些蛋白没有合适的IP抗体，无法进行内源性Co-IP实验；通过构建带标签的表达载体，使目标蛋白与标签融合表达，再借助标签抗体即可完成Co-IP实验，但需要注意合适的转基因方法又是影响该方法成功的关键。
pull down技术将目标蛋白进行体外原核表达，使标签蛋白（GST或His等）与目标蛋白融合表达，借助标签的亲和介质将目标蛋白纯化出来，可以不受抗体、物种限制，比较轻松的获得目标蛋白的结合蛋白，还可以通过外源同时表达目标蛋白和待测蛋白，确定它们是否发生直接的相互作用，但该方法无法得知体内真实的结合情况。
酵母双杂交技术是比较古老的一种技术，将目标蛋白和待测蛋白与GAL4 的两个结构域BD和AD融合表达，在酵母细胞中，2个蛋白的结合使得BD和AD在空间上靠近，从而激活报告基因lacZ的表达。但是由于受试蛋白都需要和 AD/BD 结构域形成融合蛋白，空间构象可能改变；另外假阳性率也比较高。
荧光双分子互补（BiFC）技术将目标蛋白和待测蛋白分别与GFP的两个片段融合表达，转染细胞后，2个蛋白的结合使得GFP两个片段空间上靠近，从而发出绿色荧光，该技术观测直观，操作简便，但空间分辨率大约 250nm，对于蛋白质相互作用来说依然是个相当远的距离，因此位置上靠近但并未结合的蛋白也可能显示阳性结果，假阳性率较高；另外该技术可以验证蛋白间的相互作用，但不能筛选未知互作蛋白。
荧光共定位技术依靠荧光确定蛋白质具有相同定位，用于辅助证明而非直接证明细胞内蛋白间的相互作用。
| 服务项目 | 服务内容 | 结果交付 | 实验周期 | 客户提供 | 价格 |
Co-IP WB （验证型） | 样本质检 （Western blot检测诱饵蛋白和待测蛋白） | 样本的诱饵蛋白Western blot检测图 样本的待测蛋白Western blot检测图 | 3-4周 | 实验样本 诱饵蛋白的IP级抗体 待测蛋白抗体 实验信息表 | |
Co-IP调取诱饵蛋白及其互作蛋白 （2组：实验组、对照组） | IP产物的诱饵蛋白Western blot检测图 IP产物的待测蛋白Western blot检测图 CoIP实验报告 | ||||
Co-IP MS （筛选型） | 样本质检（Western blot检测诱饵蛋白） | 样本的诱饵蛋白Western blot检测图 | 6-7周 | 实验样本 诱饵蛋白的IP级抗体 实验信息表 | |
Co-IP调取诱饵蛋白及其互作蛋白 （2组：实验组、对照组） | IP产物的诱饵蛋白Western blot检测图 CoIP实验服务报告 | ||||
| IP产物的质谱检测及数据分析 | 质谱（LC-MS/MS）检测结果及报告 互作蛋白筛选表格 生物信息学分析结果和报告 |
样本类型 | COIP-WB 建议送样量 | COIP-MS 建议送样量 |
| 动物细胞 | 3*10e7个细胞/组（约3个10cm皿） | 5*10e7个细胞/组（约5个10cm皿） |
| 动物组织 | 1g/组 | 2g/组 |
| 植物叶片 | 2g/组 | 4g/组 |
| 植物根或果实 | 4g/组 | 8g/组 |
| 菌体 | 50ul菌体沉淀/组 | 100ul菌体沉淀/组 |
▲注意：这里列出的均为每组样本的送样量，如果实验和对照组用的样本一致，此样本量*2。详细送样指南可联系靖瑞百康生物客服或销售索取。
保存及运输：-80℃保存，干冰取样/运输，至少在送样前2天通知我司。
Co-IP WB：诱饵蛋白和待测蛋白Western blot检测图（阳性）
Co-IP MS：诱饵蛋白Western blot检测图
Co-IP MS：质谱检索表格（部分展示）
Co-IP MS：互作蛋白生信分析结果（部分展示）
Jiang S.Y. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP.
Cancer Research. 2019. (中科院1区，IF=13.312).
转移性前列腺癌具有很高的致命性。已有报道表明，胆固醇与前列腺癌的发展有关；前期研究发现，胆固醇可以诱导前列腺癌细胞发生上皮-间质转化（EMT），但其作用及潜在机制尚不清楚。本研究证明胆固醇介导APMAP上调，APMAP通过与EGFR竞争结合EPS15R，进而抑制EGFR降解，激活ERK1/2通路，促进前列腺癌细胞EMT；提出APMAP可能是一种关键的调节剂，为高脂肪饮食、肥胖和癌症转移之间提供了联系。
 | 1. Li H.B. et al: The plant ESCRT component FREE1 shuttles to the nucleus to attenuate abscisic acid signaling. Nature Plants. 2019，IF=17.352. |
| 2. Jiang, S. et al: Cholesterol Induces Epithelial-to-Mesenchymal Transition of Prostate Cancer Cells by Suppressing Degradation of EGFR through APMAP. Cancer Research.2019，IF= 13.312. |
| 3. Huang C.Y. et al: UBAP2L arginine methylation by PRMT1 modulates stress granule assembly. Cell Death Differ. 2020 , IF=12.067. |
