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T7耐高温高产量RNA合成试剂盒
产品简介
T7耐高温高产量RNA合成试剂盒可在37~52℃条件下进行高效的体外转录，最佳温度为37℃，50℃反应条件下仍然保留60%以上的活性，而野生型在此温度下无活性。在30µL标准体系中，1µg模板投入可转录产出250-300µg的产物，在6000nt长度依然保持优良的转录效果。
T7高产耐热的RNA合成试剂盒可在体外高效合成多种类型的RNA，如mRNA、lncRNA、shRNA等。
性能优势
1.提升GC含量较高RNA的转录效率；
2.提升长片段RNA的合成能力；
3.在使用帽类似物时，提高共转录的加帽效率；
4.减少dsRNA副产物的形成，降低合成RNA的免疫原性。
下游应用
利用该试剂盒得到的RNA适用于多种下游应用，如RNA结构和功能研究、反义RNA及RNAi实验、微阵列分析、显微注射、体外翻译和RNA疫苗等。
T7 RNA Polymerase对T7噬菌体启动子具有高度的特异性，并可以其作为启动子，DNA 作为模板体外合成正义链或反义链RNA。双链线性平末端或5’突出末端DNA均可作为T7 RNA Polymerase的底物模板，因此线性质粒、PCR 产物均可用作体外合成RNA的模板。
产品规格
产品名称 | 货号 | 规格 | 目录价（元） | 保存条件 |
GSPure®T7 Thermostable and High Yield RNA Synthesis Kit | R0405 | 50 rxns | 2080 | -20℃ |
耐热性强：
GSPure®T7 Thermostable and High Yield RNA Synthesis Kit在50℃下仍能保持活性并高效转录。
转录长度范围广：
GSPure®T7 Thermostable and High Yield RNA Synthesis Kit在合成300~6000nt长度的转录本时保持优良的转录效果。
转录产量高：
GSPure®T7 Thermostable and High Yield RNA Synthesis Kit的30μL反应体系中，1μg DNA模板投入可合成250~300μg RNA。
Q&A
1、低产量全长RNA
如果转录模板是产生全长的RNA，其产量可能明显低于预期；DNA模板里包含的污染物可能会抑制RNA聚合酶的活性，或者可能由于DNA的浓度不正确。或者说，DNA模板可能需要额外的纯化,建议用酚氯仿抽提法。
2、低产量短转录本
短转录本（<0.3 kb）的高产量可以通过增加孵育时间和增加模板的量来获得。孵育反应长达16 h或者使用多达2 µg的模板将会有助于实现最大产量。
3、RNA产物片段大于预期
如果电泳显示产物条带大于预期，可能原因：①质粒模板可能没有完全线性化；②有义链3'端为突出结构；③RNA存在未完全变性的二级结构。建议确认模板结构，并将电泳方式由琼脂糖胶换成变性胶来检测RNA产物。
4、RNA转录本在变性胶中污染
如果RNA开始出现在变性的聚丙烯酰胺胶或琼脂糖凝胶上（例如污染），这意味着RNA酶污染了DNA模板。污染有RNA酶的DNA模板会影响合成转录本的长度（比预期的的转录本短）。如果质粒模板污染了RNA酶，有必要用酚氯仿方法抽提一遍，再沉淀DNA，用RNase-free Water溶解
5、转录产物产量低
模板与产量密切相关，实验组产量明显低于对照组，可能原因：①实验模板中有抑制反应的成分；②实验模板本身原因。建议做一个对照组，一个实验组。若对照组产量正常但实验组产量低，说明实验模板本身原因导致产低，请尝试以下方案解决：
a.重新纯化模板；b确定模板定量以及其完整性；c.延长37℃反应时间；d.加大模板投入量；e.尝试其它的启动子和RNA聚合酶。
6、产物电泳拖尾现象
电泳过程中有拖尾现象，可能原因：①实验操作过程被RNA酶污染；②DNA模板被RNase污染。体系中的RNA酶抑制剂只能抑制痕量的RNA酶残留，建议重新纯化模板DNA，并在实验过程中使用RNase-free的枪头和EP管，佩戴一次性乳胶手套和口罩，所有试剂均用RNase-free ddH2O配制。
