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慢病毒包装试剂盒

 


增强型慢病毒包装试剂盒Lentiviral Packaging Kit

产品简介

北京靖瑞百康生物生物慢病毒包装试剂盒,对包装系统进行了优化,增加了我司特有的慢病毒出毒增强培养基。相同的包装量,相比较实验室常规的包装体系能增加3-10倍的出毒量,让您的病毒包装简单快捷,让初学者也能快速包装高滴度的慢病毒。试剂盒的组分包含包装质粒、转染试剂、转染增强剂、慢病毒出毒增强培养基等。适用于基因过表达和干扰慢病毒的包装,以及后续稳定细胞株的构建。

客户只需构建骨架质粒,和试剂盒中的包装质粒Easy Mix11混合,用LipoX Transfection Reagent将混合后的质粒转染293T细胞,8h就能看到荧光,48h就能收获高滴度的慢病毒,利用慢病毒浓缩液或者超滤柱能快速浓缩纯化病毒,为后续的感染实验提供高纯度高滴度的病毒。

产品信息

产品名称

产品编号

规格

储存

价格(元)

Lentiviral Packaging Kit慢病毒包装试剂盒

OGL-LV-10T

10T

-20℃/4

2000.00

Lentiviral Packaging Kit慢病毒包装试剂盒

OGL-LV-20T

20T

-20℃/4

3600.00

产品组分

组分名称

储存

产品编号/规格

10T

20T

1)Easy Mix

-20℃

75μl

150μl

2)转染增强剂

4

300ul

600ul

3)LipoX Transfection Reagent

4

375ul

750ul

4)EGFP对照质粒(Amp+

-20℃

25μg

50μg

5)出毒增强培养基

4

475ml

950ml

 

 

运输与保存方法
冰袋运输。

组分1)(4)-20保存

组分(2)(3)转染试剂 LipoX 5)出毒增强培养基4保存
质粒准备
慢病毒骨架质粒构建与大提:构建含目的基因或shRNA的骨架质粒,并进行大提获得足够质量的无内毒素质粒,且所提质粒DNA A260/A2801.82.0之间,浓度大于0.8μg/μl

细胞状态:选择状态良好的293T细胞进行病毒包装,尽量选择低代数细胞。

实验流程

实验开始之前,在出毒增强培养基中加入25ml优质胎牛血清(5%血清),转染前一天即开始使用此培养基,也可以用此培养基调整细胞状态。
1293T细胞准备:转染前一天,将已经状态良好的293T细胞以合适比例接种到10cm培养皿中,当细胞长到80%左右时准备转染;
2)转染:转染前视细胞状态和密度决定是否提前换液。取两个无酶无菌的1.5ml EP管,在AB管中先都加入500μl Opti-MEM,然后再分别加入质粒和转染试剂,详细内容参考下表:

组分

体积

Opti-MEM(A管)

500μl

骨架质粒DNA+Easy Mix(A管)

7.5μg+7.5μl(7.5μg)

Opti-MEM(B管)

500μl

LipoX(B管)

37.5μl

B管转染试剂混合液加到A管中,轻轻混匀后,室温放置15min~20min后,再将AB管混合液加到细胞中摇匀然后加入转染增强剂10ul(10ml体积加10ul),置于CO2培养箱继续培养;
3)换液:转染过液后,小心弃掉细胞上清(注意收集上清后需要灭菌处理),然后加入10ml新鲜的培养基继续培养;
4)病毒收集:换液36-48h后,吸取细胞上清液于50ml离心管,4保存,再重新加入10ml新鲜的培养基,24h后再收集一次细胞上清于第一次的离心管中;
5)病毒处理:44000rpm离心10min收集上清液,并用用0.45μm滤器过滤后转移到新的离心管中。对病毒进行分装保存,可以直接用于下游实验。如果对病毒的滴度及纯度有较高要求,可用本公司的慢病毒浓缩液(OGL–CELL002)对病毒原液进行浓缩与纯化。也可以使用超滤管超滤实现病毒的浓缩;
6)病毒浓缩:使用本公司的慢病毒浓缩液(OGL–CELL002)进行病毒的浓缩,按病毒原液的1/4体积加入病毒浓缩液,混匀后4过夜(每2030min混合一次,共进行3-5次)。第二天,44000rpm,离心 20min,吸弃上清后静置管子12分钟,吸走残余液体,再加入适量的PBS或培养基溶解慢病毒沉淀;超滤选择100KD大小的超滤管,4000-6000rpm4离心。

7)病毒分装与保存:将病毒原液或浓缩液按合适体积进行分装,再保存于-80
注意事项

1、构建稳定细胞株时,可用病毒感染增强剂和嘌呤霉素对细胞进行感染和筛选。

2、为了您的健康,实验操作过程尽量在生物安全柜中完成,并做好个人防护,请穿实验服和带一次性手套。所有实验废弃物均需要进行灭菌处理。

3、小量病毒包装时,也可以使用小提质粒。转染时如无opti-MEM,可以用PBS、生理盐水或无血清DMEM代替

4、在慢病毒包装过程中使用opti-MEM培养基,将出毒增强剂按照比例((10ml体积加300ul)加入opti-MEM培养基培养细胞,会获得更好的出毒效果。

北京靖瑞百康生物生物技术有限公司

邮箱:info@generaybio.com


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